ELISA测AFP试验临界值的确定通常涉

ELISA测AFP试验临界值的确定通常涉及到一系列实验步骤和数据分析。以下是基于搜索结果的确定方法：

实验原理：在微孔板上包被纯化的甲胎蛋白抗体（抗AFP），加入待测血清和酶标抗体（抗AFP-HRP），血清中的AFP与微孔板上的抗AFP和不同量的抗AFP-HRP结合，洗涤分离后，加入酶底物系统进行显色反应。当样品中分析物浓度处于临界值时，用定性试验重复检测，将产生50%的阳性结果和50%的阴性结果。

试剂与器材：包括已知浓度50ng/ml的AFP阳性标本、抗AFP包被的酶标板、AFP阳性对照、AFP阴性对照、抗AFP-HRP试剂、浓缩洗涤液、显色液A液、显色液B液、终止液等。

试验方法：

实剂准备：用前30分钟将酶标试剂盒从冰箱取出平衡至室温。

将待测血清用生理盐水分别稀释至10ng/ml、20ng/ml、25ng/ml、30ng/ml。

温育30min，37℃。

洗板机洗涤五次，最后一次尽量扣干。

加显色剂A、B各50μL，振荡混匀，避光显色37℃，15min。

加终止剂50μL，振荡混匀，在450nm的波长和630nm双波长检测，测定每个孔A值。

结果判断：

阳性判定值=阴性对照孔A均值Nc×2.1。

样品A值小于CO值为AFP阴性。

样品A值大于等于CO值为AFP阳性。

阴、阳性结果各占50%的浓度即为临界值。

结果处理：以浓度为横坐标，阳性率为纵坐标，找出阳性率为50%的浓度的临界值（坐标图）。

质量控制：每板应设阴性对照孔2孔、阳性对照孔2孔、空白对照2孔。

注意事项：

血清或血浆包括用EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂采集的血浆均可使用。采集后尽早进行实验，可在2-8℃储存7天。不要使用任何热处理过的样品。

不能检测含叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性。在确定了临界值后，还需进行验证实验以确保其准确性和可靠性。选取一批具有代表性的不同AFP浓度的血清样本，重复上述试验步骤，统计阳性与阴性结果的比例，进一步确认临界值的适用性。若验证结果显示临界值与预期相符，则可用于后续的临床检测。

     在实际操作中，还需注意操作人员的专业技能和实验环境的稳定性，以减少误差。定期对实验器材进行维护和校准，确保实验数据的准确性。同时，建立详细的实验记录，包括样本信息、实验步骤、试剂使用、数据结果等，以便后续的数据分析和结果追溯。

对于实验结果的解读，应结合患者的临床表现和其他检查结果进行综合判断，避免单一指标的误判。若患者对实验结果有疑问，应及时进行复查和解释，确保患者能够正确理解实验结果，并采取相应的医疗措施。

总之，ELISA测AFP试验临界值的确定是一个复杂而严谨的过程，需要严格按照实验步骤进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。