感受态细胞的制备及溶液配制的操作技能

      感受态细胞的制备及溶液配制，是分子生物学实验中的一项关键步骤，它直接关系到后续基因克隆、转化等实验的成功与否。这一过程犹如为微生物细胞打造一扇开启新世界的“门”，让外源DNA得以顺利进入并发挥其作用。

     在制备感受态细胞时，首先需要挑选处于对数生长期的细胞，它们如同正值壮年的勇士，活力四射，易于接受外界的“礼物”。随后，通过一系列精细的化学或物理处理，如使用冰冷的氯化钙溶液轻轻“抚摸”这些细胞，使它们的细胞膜变得柔软而通透，仿佛为DNA的进入铺设了一条“绿色通道”。

                     

实验步骤

1. 挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2mlSOB 培养液中，37℃摇床。

2. 取 0.5-1ml 培养的菌液 转种到 50ml SOB 中，18℃剧烈震荡，直到 A600达到 0.6。

3. 将培养物转移到 50ml 离心管中，4℃ 4,000rpm/min离心 10min。同时在冰浴 上配置 TB 溶液。

4. 弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。

5. 取 1ml 刚配的 TB 溶液打散菌体沉淀，再加入 15mlTB（1/3 体积的起始培养 液） ，冰浴10-15min，4℃ 4,000rpm/min离心 10min。

6. 弃上清，沉淀重悬于 4mlTB（1/12.5 体积的起始培养液） ，冰浴10min。

7. 加入 280μl DMSO，缓缓滴入并轻轻摇晃，使其充分混合均匀，冰浴 10min。

8. 将菌液分装于 EP 管中，- 80℃或液氮冻存。

9. 取两管感受态细胞分别加入 1μl 无菌 ddH2O（阴性对照）和 1μl 纯质粒（阳性 对照）进行转化（见后） ，以检测感受态的质量阴。性对照平板上应该无菌落 生长，阳性对照平板上菌落数目的多少显示感受态效率的高低。

    溶液的配制同样不容小觑。氯化钙溶液的浓度、pH值以及无菌状态，都是影响感受态细胞制备质量的关键因素。它们需要被精确地调配，如同调配一剂珍贵的魔法药剂，任何细微的偏差都可能导致实验的失败。此外，为了保持细胞的活性，整个制备过程需在冰上进行，仿佛为这些细胞营造了一个寒冷的“庇护所”，使它们能在最佳状态下接受DNA的“馈赠”。

    感受态细胞的制备及溶液配制是一项精细而复杂的任务，它要求实验者具备严谨的科学态度、熟练的操作技能以及对细节的追求。只有这样，才能成功地为外源DNA打造一个温暖而安全的“新家”，为后续的分子生物学研究奠定坚实的基础。而安全的“新家”，为后续的分子生物学研究奠定坚实的基础。
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