还在为细胞原代培养和传代培养的区别犯愁？这一期，我们一起探讨一下它们的秘密！
      首先，我们要明白什么是细胞原代培养。简单来说，原代培养就是从机体取出后立即培养的细胞，它们保持着原有的遗传特性和生理状态，非常接近体内的真实环境。而传代培养，则是将原代培养的细胞在体外经过多次传代后得到的细胞系。这些细胞已经适应了体外环境，具有稳定的生长特性，适合进行长期的培养和实验。
现在，我们来进行一个小测试，看看你对这两种培养方式有多了解。
                           
  请问：原代培养和传代培养的主要区别是什么？A. 原代培养更接近体内环境 B. 传代培养适应体外环境 C. 原代培养适合长期实验 D. 传代培养保持原有遗传特性。答案是A和B哦！

   原代培养：在动物细胞培养中，将动物的组织取出来后，先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞，然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该细胞悬浮液放入培养瓶中，在培养瓶中培养。这个过程称为原代培养。也有人把第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。
 原代培养操作步骤
              
(一)胰酶消化法

1.器材:将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置 75% 酒精泡 2-3 秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取组织，置平皿中。

2.用 Hank's 液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。

3.用手术剪将组织剪成小块(1mm)，再用 Hank's 液洗三次，转移至小青霉素瓶中。

4.视组织块量加入5-6 倍体积的0.25%胰酶液，37℃ 中消化 20-40 分钟，每隔 5 分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。

5.加入 3-5ml 培养液以终止胰酶消化作用(或加入胰酶抑制剂)。

6.静置 5-10 分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。

7.1000rpm，离心 10 分钟，弃上清液。

8.加入 Hank's 液 5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。

9.加入培养液 1-2ml(视细胞量)，血球计数板计数。

10.将细胞调整到 5×10/ml  左右，转移至 25ml 细胞培养瓶中，37℃ 下培养。

细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同(如胶原酶，透明质酶等)。
                                    
(二)组织块直接培养法

自上方法第 3 步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。于 37℃ 静置 3-5 小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中(勿使组织漂起)，37℃ 继续培养。
   传代培养：细胞在培养瓶中贴壁生长。随着细胞的生长和增殖，培养瓶中的细胞越来越多，需要定期地用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中培养，这称为传代培养。
传代培养培养步骤
1、附着型胞(adherentcell)

(1)吸掉旧培养液。(2)用 D-PBS 洗涤细胞一至二次。

(3)加入 trypsin-EDTA 溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃ 作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉 trypsin-EDTA 溶液。(若不移去trypsin-EDTA，则在 trypsin-EDTA 作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止 trypsin 作用，离心后再吸掉上清液。

(4)轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
                                                            
2、悬浮型细胞(suspensioncell)

(1)吸出细胞培养液，放入离心管中，离心 1000rpm5 分钟。

(2)吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

3、融合瘤(hybridoma)

(1)有些hybridomacell需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。因此继代培养不需离心后更换培养基，直接添加新鲜培养基稀释细胞浓度即可。若体积太大，可倾斜放置，或分殖至新培养瓶中。

主要区别
原代培养:即第一次培养，是指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。有几方面含义:

1、培养物一经接种到培养器皿(瓶)中就不再分割，任其生长繁殖;

2、原代培养中的"代"并非细胞的"代"数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生多代子细胞;

3、原代培养过程中不分割培养物不等于不更换培养液，也不等于不更换培养器皿。
     那么，为什么我们需要了解这两种培养方式的区别呢？因为它们在科研实验中各有优势。原代培养能够更真实地反映细胞在体内的生理状态，对于研究某些疾病的发病机制和药物筛选具有重要意义。而传代培养则适合进行长期稳定的细胞培养，以及大量扩增细胞以满足实验需求。
希望通过这个教程，大家对细胞原代培养和传代培养的区别有了更清晰的认识。