黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒原理简述

黄鱼源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒原理简述如下:

1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的*技术平台。
             
2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。

3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
NRK-52E，大鼠肾细胞
H9c2大鼠心肌细胞（ATCC来源）
C2C12, 小鼠肌原细胞
NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系
大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）
HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系
CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系
COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞
SF9, 昆虫卵巢细胞
BRL 3A, 大鼠肝正常细胞
HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞
HET-1A, 人食管上皮细胞
RGC-5, 小鼠视网膜神经节细胞
GC-1, 鼠精原细胞
293A，人胚肾上皮细胞系（腺病毒包装级别）
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞
293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系
EPC, 大鼠血管内皮祖细胞
HBE, 正常人支气管上皮细胞系
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮细胞
HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系
HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞
HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞
LX-2, 人肝星形细胞株
3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞