探讨了茶黄素对人宫颈癌细胞株HeLa顺铂敏感性的影响

      人宫颈癌细胞；HeLa是第一个来自人体组织经连续培养获得的非整倍体上皮样细胞系，它由Gey GO等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌组织建立。传代方法：将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约3min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；生长条件：37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。存储条件：冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。
探讨了茶黄素对人宫颈癌细胞株HeLa顺铂敏感性的影响，并探讨其相关机制。
     
方法 (1)取对数生长期HeLa细胞接种于96孔板，设观察1~9组和对照1~9组，每组3个复孔。对照1~9组细胞分别加入0、5、10、15、20、25、30、35、40、50μg/mL顺铂，继续培养24 h。观察1~9组先加入10μg/mL的茶黄素，再分别加入0、5、10、15、20、25、30、35、40、50μg/mL顺铂，继续培养24 h。采用MTT法检测各组OD490，计算各组细胞存活率，然后计算顺铂对观察组和对照组HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50)。

(2)取对数生长期HeLa细胞接种于96孔板。设对照组、顺铂组、茶黄素组和联合组，每组3个复孔。对照组细胞不加药，顺铂组加入10μg/mL的顺铂，茶黄素组加入10μg/mL的茶黄素，联合组加入10μg/mL的顺铂和10μg/mL茶黄素，继续培养24 h后，采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 9、PARP和NF-κB信号通路相关蛋白p-IκBα、p-NF-κB和pAkt。

结果 (1)对照1~9组HeLa细胞存活率分别为102.54%±4.21%、98.32%±2.46%、96.11%±3.64%、90.36%±3.91%、86.29%±3.17%、81.46%±3.61%、78.92%±4.18%、70.63%±4.25%、63.28%±4.21%，顺铂对HeLa细胞的IC50为25μg/mL。观察1~9组HeLa细胞存活率分别为102.54%±4.21%、80.21%±3.82%、78.92%±4.24%、77.93%±3.95%、68.26%±3.24%、50.36%±4.29%、45.32%±4.74%、40.25%±3.21%、35.37%±3.16%，顺铂对HeLa细胞的IC50为10μg/mL。

(2)顺铂组、茶黄素组、联合组细胞Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 9、PARP相对表达量均高于对照组(P均<0.05)，联合组细胞Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 9、PARP相对表达量均高于顺铂组、茶黄素组(P均<0.05)。顺铂组、对照组细胞p-IκBα、p-NF-κB和p-Akt相对表达量相比P>0.05，茶黄素组细胞p-IκBα、p-NF-κB和p-Akt相对表达量高于对照组(P均<0.05)，联合组细胞pIκBα、p-NF-κB和p-Akt相对表达量高于顺铂组和茶黄素组(P均<0.05)。结论茶黄素能够增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与增加凋亡相关蛋白Cleaved Caspase 3、Cleaved Caspase 9、PARP表达及抑制NF-κB信号通路相关蛋白p-IκBα、p-NF-κB和p-Akt表达有关。